Дезмонд Майлс сбежав от представителей «Абстерго», кооперируется с современными ассасинами и благодаря их помощи снова погружается в Анимус. На этот раз он будет исследовать память Эцио Аудиторе да Фиренце. Действие происходит во Флоренции и Венеции конца 15 века.